微生物平板蔓延可能導致菌落難以區分，影響計數準確性。以下是處理方法和計數策略：
01、預防措施（減少蔓延發生）
添加抑制劑：在培養基中加入0.001%氯化三苯基四氮唑（TTC）或0.1%脫氧膽酸鈉，抑制細菌運動性，使菌落顯色（如紅色）便于觀察。
調整瓊脂濃度：增加瓊脂濃度至1.5%-2.0%，提高培養基硬度，限制微生物擴散。
優化涂布方法：
涂布前確保平板表面干燥（靜置10-15分鐘）。
控制接種量，避免過載（通常稀釋樣品至30-300 CFU/平板）。
采用“雙層瓊脂法”：先鋪一層薄瓊脂，凝固后再接種并覆蓋第二層。
縮短培養時間：在菌落剛形成時（如18-24小時）及時觀察，避免過度生長。
02、 已蔓延平板的計數方法
分區計數法：
將平板劃分為若干區域（如4-8個扇形區），統計各區域清晰可辨的菌落數，取平均值后乘以分區數。
僅計數蔓延邊緣以外的獨立菌落。
標記追溯法：
用記號筆在平板底部標記蔓延區域的邊界，統計未被覆蓋的獨立菌落。
估算與報告：
若蔓延面積＜50%，可計數未蔓延區域的菌落并推算總量（注明估算方法）。
若蔓延嚴重，記錄為“蔓延生長”（Spreading Growth, SG）或“無法計數”（Too Confluent, TC）。
圖像分析軟件：
圖像分析軟件：
使用菌落計數儀或圖像處理軟件（如ImageJ、OpenCFU）識別邊緣清晰的菌落。
03、特殊微生物的處理
運動性細菌（如變形桿菌）：
使用含膽鹽的培養基（如MacConkey Agar）抑制運動。
降低培養溫度至25-30℃（部分細菌運動性減弱）。
真菌或放線菌：
真菌或放線菌：
添加抗生素（如放線菌酮）抑制污染菌，或使用低營養培養基減緩生長速度。
04、數據記錄與報告
明確標注：在實驗記錄中注明“平板蔓延”，說明處理方式（如“僅計數未蔓延區域”）。
稀釋重復：若多個稀釋度均出現蔓延，選擇可計數的最高稀釋度結果，并結合其他稀釋度數據綜合判斷。
驗證實驗：重新優化條件（如更低稀釋度、添加抑制劑）后重復實驗。
05、參考標準
國際標準：
ISO 4833-1:2013 建議：若蔓延面積＞平板面積的50%，數據無效。
USP <61>：允許報告“估計值”并注明蔓延情況。
06、示例記錄
“10稀釋度平板出現約70%面積蔓延，未蔓延區域計數為45 CFU，估算總量為150 CFU（方法：按面積比例換算）。”
“10稀釋度平板完全蔓延，標記為TC，實驗重復中10稀釋度結果為82 CFU。” 
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